ESPECTROFOTÓMETRO

Un espectrofotómetro es un instrumento usado en el análisis químico que sirve para medir, en función de la longitud de onda, la relación entre valores de una misma magnitud fotométrica relativos a dos haces de radiaciones y la concentración o reacciones químicas que se miden en una muestra. También es utilizado en los laboratorios de química para la cuantificación de sustancias y microorganismos.

Algunas partes externas del espectofotómetro son:

*Botón de encendido y calibración al aire (0% T).
*Compartimiento de la muestra.
*foco del piloto.
*Botón selector de longitud de onda.

*Botón de calibración con el blanco o el testigo.
*Tecla para imprimir (Print Button).

*Interruptor(Lamp Power Switch).
*Botón  de encendido de la lampara  de deuterio.
*Botón de espejos .
*Botón  de encendido y apagado del aparato.
*Botón selector de longitud de onda.
*Botón seelctor de sensibilidad.
*Botón de ajuste a 0 de A y 100% de T.

Los espectofotómetros que trabajan con la radiación visible y ultravioleta presentan doble fuente de radiación (lámparas) y dos fotodetectores (fototubos), y están  equipados  con espejos móviles para poder reflejar la radiación  en la dirección necesaria.

La espectofotometría VIS-UV  tiene una gran aplicación en las determinaciones cuantitativas en muchas áreas, las cuales, en su mayoría, en la actualidad están autorizadas por NOM (Norma Oficial Mexicana).

En el área microbiológica y bioquímica:

En el control de cinética enzimática ( por ejemplo: con las siguientes enzimas: sacarasa, invertasa, etc.), determinan los cambios por efecto  de concentración por sustrato, efecto causado por cambios  de pH.

a)Determinan de fósforo en DNA.

b) Determinación  del contenido de RNA.

c)Determinación de digestibilidad in vitro.

d)Determinación  de concentración de alcoholes superiores.

Determinaciones en los analisis clinicos en sangre (mg/dl):

-Glucosa 

-Urea

-Creatinina

-Ácido úrico

-Colesterol

-Proteínas

-Bilirrubinas

-Hemoglobina

-Fosfatasa alcalina y ácida

-Fósforo

-Calcio

-Albumina

http://es.wikipedia.org/wiki/Espectrofot%C3%B3metro

hemograma

El hemograma es un análisis de sangre en el que se mide en global y en porcentajes los tres tipos básicos de células que contiene la sangre, las denominadas tres series celulares sanguíneas:

*Serie eritrocitaria o serie roja

*Serie leucocitaria o serie blanca

*Serie plaquetaria

Cada una de estas series tiene unas funciones determinadas, y estas funciones se verán perturbadas si existe alguna alteración en la cantidad o características de las células que las componen.

La serie roja está compuesta por los hematíes o glóbulos rojos. Su función primordial es transportar el oxígeno desde los pulmones a donde llega a través de la respiración a todas las células y tejidos del organismo.

En el hemograma se cuantifica el número de hematíes, el hematocrito, la hemoglobina y los índices eritrocitarios:  

• El hematocrito mide el porcentaje de hematíes en el volumen total de la sangre.
• La hemoglobina es una molécula que forma parte del hematíe, y que es la que transporta el oxígeno y el dióxido de carbono; se mide su concentración en sangre.
• Los índices eritrocitarios proporcionan información sobre el tamaño (VCM), la cantidad (HCM) y la concentración (CHCM) de hemoglobina de los hematíes; el más usado es el VCM o volumen corpuscular medio.

Todos estos valores varían dentro de la normalidad según la edad y el sexo.

La serie blanca está formada por los leucocitos o glóbulos blancos. Sus funciones principales son la defensa del organismo ante las infecciones y la reacción frente a sustancias extrañas.

El recuento de leucocitos tiene dos componentes. Uno es la cifra total de leucocitos en 1 mm3 de sangre venosa; el otro, la fórmula leucocitaria, mide el porcentaje de cada tipo de leucocitos, que son: segmentados o neutrófilos, monocitos, linfocitos, eosinófilos y basófilos. El aumento del porcentaje de un tipo de leucocitos conlleva disminución en el porcentaje de otros.

Estos valores varían dentro de la normalidad según la edad.

La serie plaquetaria compuesta por plaquetas o trombocitos, se relaciona con los procesos de coagulación sanguínea.

En el hemograma se cuantifica el número de plaquetas y el volumen plaquetario medio (VPM). El VPM proporciona información sobre el tamaño de las plaquetas.

El recuento de plaquetas también varía con la edad..

rencuentro de plaquetas

tincion frotis

.
Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología y bacteriana y las posibles agrupaciones de células que pudiera haber.

en este proceso puede ser muy util para la La fidelidad de la información obtenida de ellos, esta depende en gran parte de la calidad de las extensiones. Estas no deben ser demasiado gruesas porque las células se amontonarían y no podrían ser reconocidas, ni diferenciarse, ni demasiado delgadas porque las células se deformarían, distorsionarían y destruirían. Por eso los frotis de sangre deben ser bien nivelados y para obtener buenos resultados es necesario que:
 




fijacion de un frotis


  plaquetas


neucemia aguda
*Tanto portaobjetos como cubreobjetos deben estar bien limpios y desengrasados
*La gota de sangre usada para la preparación de el frotis no debe ser muy grande ni pequeña, de preferencia de el tamaño de la cabeza de un alfiler
*La sangre no haya estado en contacto con anticoagulante, pues podría deformarse la morfología celular si pasase esto.
*La lectura de las extensiones se hará en las zonas donde los eritrocitos casi se tocan.

VENOPUNCION

*Objetivo: Que el alumno aprenda los conocimientos y actitudes que se desarrollan dentro del laboratorio y que sea competente en la realización de una venopuncion.
¿Qué actitudes se debe tomar?
Respecto al paciente, organización, responsabilidad, limpieza, orden, etica.
*Información Teórica:
La venopuncion es la extracción de sangre de una vena, generalmente tomada por un químico, bacteriólogo, parasitólogo, laboratorista, o personal de enfermería, paramédico o estudiante de estas profesiones.
Por lo general se extraen de 5 a 25 ml para que la muestra sea considerada adecuada para el tipo de pruebas sanguíneas que se hayan solicitado. La sangre se coloca en un tubo comercialmente preparado para transportar la sangre y conservarla así de manera apropiada. Ocasionalmente se extraen minúsculas cantidades de sangre como muestras de pacientes diabetes, recién nacidas o previas a una donación de sangre. También se realiza una venopuncion para una donación de sangre o en pacientes con policitemia; de quienes se extraen unos 350-500 cc de sangre.
*Materiales:
-jeringa estéril desechable
-torundas
-Gradilla
-Alcohol
-tubo de ensayo con anticoagulante
-ligadura
*Fundamentos:
Se practica cuando el medico solicitante ordena un análisis.
Técnica
1.-Solicitar al paciente el brazo y palpar la vena.
2.-Despues de localizar la vena hacer la asepsia.
3.-Poner el torniquete.
4.-Hacemos la venopuncion con el material elegido.
5.-Despues de tomada la muestra retiramos el torniquete y la aguja se pone algodón y se le dobla el brazo al paciente.
6.-Se coloca en un tubo con anticoagulante y se mueve lentamente.
*Precauciones:
-De preferencia el paciente no debe observar la extracción.
-Inspirarle confianza al paciente.
-Mantener la higiene.
-Tomar la muestra en zonas visibles.

*Implicaciones:

.Sincope (perdida repentina del conocimiento y de la sensibilidad debida a la suspensión súbita y momentánea de la acción del corazón)

.Asteria

.Infarto

.Hemofilis

*Riesgos:
-Riesgos de contaminación
-Formación de hematomas

Tinción de Wright

 

La tinción de Wright es un tipo de tincion usada para facilitar la diferenciación de los tipos de celulas de la sangre. Se usa principalmente para teñir frotis de sangre y punciones medulares, para ser examinadas al microscopio.

Esta coloración es conocida como policromática debido a que produce varios colores. Es una solución de alcohol metílico de un colorante ácido (eosina) y otro básico (azul de metileno). El alcohol sirve como un fijador del frotis sanguíneo al portaobjetos. El amortiguador, que consiste en una solución tamponada, mantiene el pH del colorante y favorece la mejor absorción por los diferentes componentes celulares

 Lleva el nombre de James Homer Wright, su descubridor, que la obtuvo modificando la tinción de Romanowsky, en 1902.

Debido a que ayuda a distinguir fácilmente las células de la sangre se convirtió en una técnica muy usada para el conteo de los globulos blancos, una técnica rutinaria usada cuando hay sospecha de infecciones.

 LINFOCITO

 BASOFILO

 EOSINOFILO

NEUTROFILO

EDTA

El EDTA  (C10H15N2O8) o sal disodica ,dipotasica del acido etilendiaminotetraacético, es un anticoagulante de eleccion para hematologia, se utiliza a una concentración 1mg por 1 c.c. de sangre o 0.5 mls de solución al 1 % para 5 mls de sangre, o 0.1 mls de solución al1% para 1 mls de sangre.Aunque cabe mencionar que su utilizacion en exceso hace que se alteren las celulas sanguineas por lo general se recomienda en una prolongacion de 24 horas.

Este anticoagulante se utiliza principalmente para los recuentos celulares ademas que permite la realizacion del hematocrito y del frotis sanguineo hasta dos horas despues de la extraccion de la muestra ademas de que impide la aglutinacion de las plaquetas  Las sales de potasio tienen la ventaja con respecto a la desodio, por ser más fácilmente solubles en sangre cuando las usamos a partir del producto solido, sin embargo las tres sales afectan el tamaño del eritrocito.

#EDTA

•Efecto quelante sobre el Ca

•EDTA-Na

2•EDTA-K

3  Para recuento celular en autoanalizador

#Heparina

•Impide el paso protrombina

→trombina

•No modifica las características celulares de leucocitos yeritrocitos, pero proporciona color azul en los frotis detinciones panópticas

                            LA   SANGRE

                La sangre es un tejido  fluido que circula por capilares, venas y arterias  de todos los vertebrados e invertebrados.

Su colo característico es debido a la presencia del pigmento hemoglobínico  contenido en los eritrocitos.

      Tiene un fase solida ( elementos formes que incluye a los leucocitos, eritrocitos y plaquetas) y una fase liquida, representada por plasma sanguínea. 

Como todo tejido, la sangre se compone de células y componentes extracelulares. Estas dos fracciones tisulares vienen  representadas por:

¬ Los elementos formes o elementos figurados._ estos elementos  son semisólidos.

¬ El plasma sanguíneo._un fluido traslucido y amarillento que representa la matriz extracelular liquida en la que están suspendidas los elementos formes. 

      Los elementos formes  constituyen  alrededor del 45% de la sangre. Tal magnitud porcentual se conoce con el nombre de hematocrito (fracción celular).

El otro 55% esta representado por el plasma sanguíneo.

       Los elementos  formes  de la sangre  variados  en tamaño, estructura y función; se agrupan en :

*Las células sanguíneas, que son glóbulos blancos o leucocitos.

*Los derivados celulares, que nos no células sino fragmentos  celulares; están representados por los eritrocitos y las plaquetas, son los únicos componentes sanguíneos que cumplen sus funciones dentro del espacio vascular.

 GLÓBULOS ROJOS

 Los glóbulos rojos son también llamados eritrocitos. Su valor normal (conteo), en la mujer,

promedio es de alrededor de 4 800 000 y en el varón aproximadamente 5 400 000 hematíes por milímetro cúbico o microlitro.

Los eritrocitos tienen forma  de disco, bicóncavo, deprimido en el centro. Los glóbulos rojos  maduros carecen de núcleo  porque lo expulsan en la médula osea antes de entrar  en el torrente sanguíneo.

Los eritrocitos en humanos adultos se forman en la médula osea.

Constituye el 96% de los elementos figurados.

GLÓBULOS BLANCOS

El conteo normal de leucocitos o glóbulos blancos está dentro de un rango de 4 500 y 11 500 células por milímetro cubico o microlitro de sangre, variable según las condiciones fisiológicas (embarazo, estrés, deporte, edad, etc.).

El recuento porcentual de los diferentes  tipos de leucocitos de conoce como ¨formula leucocitaria¨.

PLAQUETAS

Las plaquetas o también conocidas como trombocitos son fragmentos celulares  pequeños  de 2-3 micras de diámetro, ovalados y sin núcleo.

Se produce en la médula osea  a partir de ka fragmentación  del citoplasma  de los megacariocitos  quedando libres en la circulacion sanguínea.

Su valor cuantitativo normal se encuentra entre 150 000 y 450 000  plaquetas por milímetro cubico.

Las plaquetas sirven para taponar las lesiones que pudieran afectar los vasos sanguíneos.

En el proceso de coagulación (hemostasis), las plaquetas contribuyen  a la formación de los coágulos (trombos).

Así son  las responsables  del cierre de las heridas vasculares.

Una gota de sangre contiene  alrededor de 250 000 plaquetas.

Su función es coagular la sangre, como ya se mencionó´anteriormente.

De los 5 litros de sangre que posee un adulto el 55% (2 750 l) corresponden a plasma el resto (45% o 2 250 l) son células sanguíneas.

Hay  cinco tipos de leucocitos  que se clasifican según la presencia  o ausencia  granular en su citoplasma:

*Neutrofilos                               60 a 70 %

*Eosinofilos                                2 a 4 %

*Basofilos                                   0.5 a 1 %

*Linfositos                                  20 a 25 %

* Monocitos                                 3 a 8 %