ESPECTROFOTÓMETRO

Un espectrofotómetro es un instrumento usado en el análisis químico que sirve para medir, en función de la longitud de onda, la relación entre valores de una misma magnitud fotométrica relativos a dos haces de radiaciones y la concentración o reacciones químicas que se miden en una muestra. También es utilizado en los laboratorios de química para la cuantificación de sustancias y microorganismos.

Algunas partes externas del espectofotómetro son:

*Botón de encendido y calibración al aire (0% T).
*Compartimiento de la muestra.
*foco del piloto.
*Botón selector de longitud de onda.

*Botón de calibración con el blanco o el testigo.
*Tecla para imprimir (Print Button).

*Interruptor(Lamp Power Switch).
*Botón  de encendido de la lampara  de deuterio.
*Botón de espejos .
*Botón  de encendido y apagado del aparato.
*Botón selector de longitud de onda.
*Botón seelctor de sensibilidad.
*Botón de ajuste a 0 de A y 100% de T.

Los espectofotómetros que trabajan con la radiación visible y ultravioleta presentan doble fuente de radiación (lámparas) y dos fotodetectores (fototubos), y están  equipados  con espejos móviles para poder reflejar la radiación  en la dirección necesaria.

La espectofotometría VIS-UV  tiene una gran aplicación en las determinaciones cuantitativas en muchas áreas, las cuales, en su mayoría, en la actualidad están autorizadas por NOM (Norma Oficial Mexicana).

En el área microbiológica y bioquímica:

En el control de cinética enzimática ( por ejemplo: con las siguientes enzimas: sacarasa, invertasa, etc.), determinan los cambios por efecto  de concentración por sustrato, efecto causado por cambios  de pH.

a)Determinan de fósforo en DNA.

b) Determinación  del contenido de RNA.

c)Determinación de digestibilidad in vitro.

d)Determinación  de concentración de alcoholes superiores.

Determinaciones en los analisis clinicos en sangre (mg/dl):

-Glucosa 

-Urea

-Creatinina

-Ácido úrico

-Colesterol

-Proteínas

-Bilirrubinas

-Hemoglobina

-Fosfatasa alcalina y ácida

-Fósforo

-Calcio

-Albumina

http://es.wikipedia.org/wiki/Espectrofot%C3%B3metro

hemograma

El hemograma es un análisis de sangre en el que se mide en global y en porcentajes los tres tipos básicos de células que contiene la sangre, las denominadas tres series celulares sanguíneas:

*Serie eritrocitaria o serie roja

*Serie leucocitaria o serie blanca

*Serie plaquetaria

Cada una de estas series tiene unas funciones determinadas, y estas funciones se verán perturbadas si existe alguna alteración en la cantidad o características de las células que las componen.

La serie roja está compuesta por los hematíes o glóbulos rojos. Su función primordial es transportar el oxígeno desde los pulmones a donde llega a través de la respiración a todas las células y tejidos del organismo.

En el hemograma se cuantifica el número de hematíes, el hematocrito, la hemoglobina y los índices eritrocitarios:  

• El hematocrito mide el porcentaje de hematíes en el volumen total de la sangre.
• La hemoglobina es una molécula que forma parte del hematíe, y que es la que transporta el oxígeno y el dióxido de carbono; se mide su concentración en sangre.
• Los índices eritrocitarios proporcionan información sobre el tamaño (VCM), la cantidad (HCM) y la concentración (CHCM) de hemoglobina de los hematíes; el más usado es el VCM o volumen corpuscular medio.

Todos estos valores varían dentro de la normalidad según la edad y el sexo.

La serie blanca está formada por los leucocitos o glóbulos blancos. Sus funciones principales son la defensa del organismo ante las infecciones y la reacción frente a sustancias extrañas.

El recuento de leucocitos tiene dos componentes. Uno es la cifra total de leucocitos en 1 mm3 de sangre venosa; el otro, la fórmula leucocitaria, mide el porcentaje de cada tipo de leucocitos, que son: segmentados o neutrófilos, monocitos, linfocitos, eosinófilos y basófilos. El aumento del porcentaje de un tipo de leucocitos conlleva disminución en el porcentaje de otros.

Estos valores varían dentro de la normalidad según la edad.

La serie plaquetaria compuesta por plaquetas o trombocitos, se relaciona con los procesos de coagulación sanguínea.

En el hemograma se cuantifica el número de plaquetas y el volumen plaquetario medio (VPM). El VPM proporciona información sobre el tamaño de las plaquetas.

El recuento de plaquetas también varía con la edad..

rencuentro de plaquetas

tincion frotis

.
Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología y bacteriana y las posibles agrupaciones de células que pudiera haber.

en este proceso puede ser muy util para la La fidelidad de la información obtenida de ellos, esta depende en gran parte de la calidad de las extensiones. Estas no deben ser demasiado gruesas porque las células se amontonarían y no podrían ser reconocidas, ni diferenciarse, ni demasiado delgadas porque las células se deformarían, distorsionarían y destruirían. Por eso los frotis de sangre deben ser bien nivelados y para obtener buenos resultados es necesario que:
 




fijacion de un frotis


  plaquetas


neucemia aguda
*Tanto portaobjetos como cubreobjetos deben estar bien limpios y desengrasados
*La gota de sangre usada para la preparación de el frotis no debe ser muy grande ni pequeña, de preferencia de el tamaño de la cabeza de un alfiler
*La sangre no haya estado en contacto con anticoagulante, pues podría deformarse la morfología celular si pasase esto.
*La lectura de las extensiones se hará en las zonas donde los eritrocitos casi se tocan.

VENOPUNCION

*Objetivo: Que el alumno aprenda los conocimientos y actitudes que se desarrollan dentro del laboratorio y que sea competente en la realización de una venopuncion.
¿Qué actitudes se debe tomar?
Respecto al paciente, organización, responsabilidad, limpieza, orden, etica.
*Información Teórica:
La venopuncion es la extracción de sangre de una vena, generalmente tomada por un químico, bacteriólogo, parasitólogo, laboratorista, o personal de enfermería, paramédico o estudiante de estas profesiones.
Por lo general se extraen de 5 a 25 ml para que la muestra sea considerada adecuada para el tipo de pruebas sanguíneas que se hayan solicitado. La sangre se coloca en un tubo comercialmente preparado para transportar la sangre y conservarla así de manera apropiada. Ocasionalmente se extraen minúsculas cantidades de sangre como muestras de pacientes diabetes, recién nacidas o previas a una donación de sangre. También se realiza una venopuncion para una donación de sangre o en pacientes con policitemia; de quienes se extraen unos 350-500 cc de sangre.
*Materiales:
-jeringa estéril desechable
-torundas
-Gradilla
-Alcohol
-tubo de ensayo con anticoagulante
-ligadura
*Fundamentos:
Se practica cuando el medico solicitante ordena un análisis.
Técnica
1.-Solicitar al paciente el brazo y palpar la vena.
2.-Despues de localizar la vena hacer la asepsia.
3.-Poner el torniquete.
4.-Hacemos la venopuncion con el material elegido.
5.-Despues de tomada la muestra retiramos el torniquete y la aguja se pone algodón y se le dobla el brazo al paciente.
6.-Se coloca en un tubo con anticoagulante y se mueve lentamente.
*Precauciones:
-De preferencia el paciente no debe observar la extracción.
-Inspirarle confianza al paciente.
-Mantener la higiene.
-Tomar la muestra en zonas visibles.

*Implicaciones:

.Sincope (perdida repentina del conocimiento y de la sensibilidad debida a la suspensión súbita y momentánea de la acción del corazón)

.Asteria

.Infarto

.Hemofilis

*Riesgos:
-Riesgos de contaminación
-Formación de hematomas

Tinción de Wright

 

La tinción de Wright es un tipo de tincion usada para facilitar la diferenciación de los tipos de celulas de la sangre. Se usa principalmente para teñir frotis de sangre y punciones medulares, para ser examinadas al microscopio.

Esta coloración es conocida como policromática debido a que produce varios colores. Es una solución de alcohol metílico de un colorante ácido (eosina) y otro básico (azul de metileno). El alcohol sirve como un fijador del frotis sanguíneo al portaobjetos. El amortiguador, que consiste en una solución tamponada, mantiene el pH del colorante y favorece la mejor absorción por los diferentes componentes celulares

 Lleva el nombre de James Homer Wright, su descubridor, que la obtuvo modificando la tinción de Romanowsky, en 1902.

Debido a que ayuda a distinguir fácilmente las células de la sangre se convirtió en una técnica muy usada para el conteo de los globulos blancos, una técnica rutinaria usada cuando hay sospecha de infecciones.

 LINFOCITO

 BASOFILO

 EOSINOFILO

NEUTROFILO

EDTA

El EDTA  (C10H15N2O8) o sal disodica ,dipotasica del acido etilendiaminotetraacético, es un anticoagulante de eleccion para hematologia, se utiliza a una concentración 1mg por 1 c.c. de sangre o 0.5 mls de solución al 1 % para 5 mls de sangre, o 0.1 mls de solución al1% para 1 mls de sangre.Aunque cabe mencionar que su utilizacion en exceso hace que se alteren las celulas sanguineas por lo general se recomienda en una prolongacion de 24 horas.

Este anticoagulante se utiliza principalmente para los recuentos celulares ademas que permite la realizacion del hematocrito y del frotis sanguineo hasta dos horas despues de la extraccion de la muestra ademas de que impide la aglutinacion de las plaquetas  Las sales de potasio tienen la ventaja con respecto a la desodio, por ser más fácilmente solubles en sangre cuando las usamos a partir del producto solido, sin embargo las tres sales afectan el tamaño del eritrocito.

#EDTA

•Efecto quelante sobre el Ca

•EDTA-Na

2•EDTA-K

3  Para recuento celular en autoanalizador

#Heparina

•Impide el paso protrombina

→trombina

•No modifica las características celulares de leucocitos yeritrocitos, pero proporciona color azul en los frotis detinciones panópticas

                            LA   SANGRE

                La sangre es un tejido  fluido que circula por capilares, venas y arterias  de todos los vertebrados e invertebrados.

Su colo característico es debido a la presencia del pigmento hemoglobínico  contenido en los eritrocitos.

      Tiene un fase solida ( elementos formes que incluye a los leucocitos, eritrocitos y plaquetas) y una fase liquida, representada por plasma sanguínea. 

Como todo tejido, la sangre se compone de células y componentes extracelulares. Estas dos fracciones tisulares vienen  representadas por:

¬ Los elementos formes o elementos figurados._ estos elementos  son semisólidos.

¬ El plasma sanguíneo._un fluido traslucido y amarillento que representa la matriz extracelular liquida en la que están suspendidas los elementos formes. 

      Los elementos formes  constituyen  alrededor del 45% de la sangre. Tal magnitud porcentual se conoce con el nombre de hematocrito (fracción celular).

El otro 55% esta representado por el plasma sanguíneo.

       Los elementos  formes  de la sangre  variados  en tamaño, estructura y función; se agrupan en :

*Las células sanguíneas, que son glóbulos blancos o leucocitos.

*Los derivados celulares, que nos no células sino fragmentos  celulares; están representados por los eritrocitos y las plaquetas, son los únicos componentes sanguíneos que cumplen sus funciones dentro del espacio vascular.

 GLÓBULOS ROJOS

 Los glóbulos rojos son también llamados eritrocitos. Su valor normal (conteo), en la mujer,

promedio es de alrededor de 4 800 000 y en el varón aproximadamente 5 400 000 hematíes por milímetro cúbico o microlitro.

Los eritrocitos tienen forma  de disco, bicóncavo, deprimido en el centro. Los glóbulos rojos  maduros carecen de núcleo  porque lo expulsan en la médula osea antes de entrar  en el torrente sanguíneo.

Los eritrocitos en humanos adultos se forman en la médula osea.

Constituye el 96% de los elementos figurados.

GLÓBULOS BLANCOS

El conteo normal de leucocitos o glóbulos blancos está dentro de un rango de 4 500 y 11 500 células por milímetro cubico o microlitro de sangre, variable según las condiciones fisiológicas (embarazo, estrés, deporte, edad, etc.).

El recuento porcentual de los diferentes  tipos de leucocitos de conoce como ¨formula leucocitaria¨.

PLAQUETAS

Las plaquetas o también conocidas como trombocitos son fragmentos celulares  pequeños  de 2-3 micras de diámetro, ovalados y sin núcleo.

Se produce en la médula osea  a partir de ka fragmentación  del citoplasma  de los megacariocitos  quedando libres en la circulacion sanguínea.

Su valor cuantitativo normal se encuentra entre 150 000 y 450 000  plaquetas por milímetro cubico.

Las plaquetas sirven para taponar las lesiones que pudieran afectar los vasos sanguíneos.

En el proceso de coagulación (hemostasis), las plaquetas contribuyen  a la formación de los coágulos (trombos).

Así son  las responsables  del cierre de las heridas vasculares.

Una gota de sangre contiene  alrededor de 250 000 plaquetas.

Su función es coagular la sangre, como ya se mencionó´anteriormente.

De los 5 litros de sangre que posee un adulto el 55% (2 750 l) corresponden a plasma el resto (45% o 2 250 l) son células sanguíneas.

Hay  cinco tipos de leucocitos  que se clasifican según la presencia  o ausencia  granular en su citoplasma:

*Neutrofilos                               60 a 70 %

*Eosinofilos                                2 a 4 %

*Basofilos                                   0.5 a 1 %

*Linfositos                                  20 a 25 %

* Monocitos                                 3 a 8 %

  

                                    AUTOCLAVE

 Es un recipiente  metálico de paredes  gruesas  con un   cierre  hermético  que permite  trabajar  a alta presión  para realizar  una reacción  industrial, una cocción o una esterilización con vapor de agua.
La presión elevada permite que el agua alcance temperaturas  superiores a su punto de ebullición.
La temperatura y el vapor actuando conjuntamente producen  la coagulación  de las proteínas  de los microorganismos, entre ellos  las esenciales  para la vida y la reproducción de estos, llevando así su destrucción.




Funcionamiento
El autoclave  funciona permitiendo la entrada o generación de vapor  de agua  pero restringiendo su salida, hasta obtener una presión interna de 103 kPa, lo cual provoca que el vapor alcance  una temperatura de  121°C.
Un tiempo típico de esterilización  a esta temperatura  y presión es de 15-20 minutos.
Los autoclaves mas modernos  permiten realizar  proceso  a mayores temperaturas y presiones  con ciclos estándares  de 134°C a 200 kPa  durante 5 minutos  para esterilizar material metálico, llegando incluso a realizar ciclos  de vació para  acelerar el secado de material esterilizado.


Existen  dos variedades de autoclaves  de laboratorio:
*El de olla de presión
*Los modelos de desplazamiento de la gravedad  con descarga automática de aire  y vapor condensado.


Instrucciones para el funcionamiento
Debe haber agua suficiente dentro de la cámara.
Se carga el autoclave  y se aprieta la tapa manteniendo  la espita de descaroja a abierta.
Se ajusta seguidamente la válvula  de seguridad a la temperatura  requerida  y se conecta la fuente de calor.
Cuando el agua hierva, fluirá  vapor por la espita  de descarga arrastrando don él  el aire  existente en la cámara. Se deja  que salga libremente el aire y el vapor hasta  que se haya eliminado todo el aire.
Puede comprobarse  que se a eliminado fijando un extremo  de un trozo  de tubo  de goma a la  espita  de descarga  e introduciendo  el otro extremo en un cubo o otro recipiente similar que tenga agua  y las burbujas  de aire sale a la superficie. Cuando a alcanzado esta fase  se cierra la espita y se quita el tubo de goma.
Cuando la carga a alcanzado la temperatura requerida se mantiene a la presión durante 15 minutos. Al termino del periodo de esterilización se apaga el calentador y se deja que el  autoclave se enfríe.

MATERIAL VOLUMETRICO
En cualquier laboratorio existe material volumetrico  que es el que funciona para medir ciertos volúmenes  de sustancias liquidas, ademas de que este tipo  de materiales permite la medida precisa.
Estos materiales son: 



*PIPETAS
Se para transferir  líquidos y las pueden haber de distintas capacidades. las pipetas son tubos  en su mayoría de vidrio para medir volúmenes muy pequeños 1/10.
Las hay graduadas  y volumetricas. las volumetricas solo miden un volumen  en especifico. las graduadas tienen cierta capacidad de hasta 1ml.
Las micropipetas transfieren volúmenes variables  de unos pocos mililitros o microlitros de liquido.
Con esta pipeta se desplaza un volumen conocido y ajustable de aire  de la punta desechable de plástico haciendo un uso adecuado de las mismas.
 

 *PROBETAS
Son recipientes graduados, cilíndricos, con un base para la sujeción en la aparte de abajo; se utiliza  para medir volúmenes que requieren poca precisión.
Se utilizan para dispensar, tienen un pico en la parte de arriba para facilitar su vertido. a veces se utilizan para contener y suelen llevar un tapón.
Las probetas son  los materiales de mayor precisión  después de las pipetas ya que presenta un mayor  grado de escalas  y eso facilita el manejo de los volúmenes.
Las probetas existen de diferentes capacidades.


*BURETAS
Se emplean para la medida precisa de volúmenes variables y por lo tanto están divididas en muchas partes.
se usan principalmente en valoraciones.

El tamaño común es de  25  a 50 ml, graduadas cada 0.1 ml.
Son muy utilizadas en el análisis volumetrico se utilizan sobretodo para valorar disoluciones  cuya concentración no conocemos.
son tubos de vidrio mas largo que las pipetas y pueden contener un volumen de liquido variable. también hay buretas digitales, son muy precisas y proporcionan  gran rapidez en el trabajo.


*MATRAZ AFORADO
Un matraz aforado o volumetrico es un recipiente de  fondo plano con forma de pera que tiene un cuello largo y delgado. la linea delgada, linea de enrase, grabado alrededor del cuello indica el volumen del liquido  contenido a una temperatura  definida y se denomina linea de enrase.
Los matraces aforados deben llevar tapones  bien  ajustados. Los tamaños mas comunes son 25, 50, 100, 250, 500 y 1000ml
Se utilizan para  la preparación de  disoluciones de concentración conocida.

Práctica #2

EXAMEN GENERAL DE ORINA (E.G.O)

OBJETIVO:

Interpretar  y  realizar un examen general de orina.

INTRODUCCIÓN:

El “EGO” (Examen General de Orina), es una prueba de gran importancia, se lleva a cabo para tener el conocimiento del estado en el cual se encuentra el sistema urinario del paciente así como también para que el médico de un diagnóstico preciso si es que existe enfermedad renal y se le dé el debido tratamiento.

En la actualidad el examen de orina se lleva acabo siguiendo el debido procedimiento, la muestra debe tomarse correctamente y bajo las condiciones más favorables para evitar errores de interpretación; es importante etiquetar cada una de las muestras en presencia del paciente con información suficiente para evitar confusión con otras muestras.

El recipiente de recolección de la muestra debe estar limpio, debe ser de plástico, translúcido y no volverse a utilizar, la tapa debe cerrar herméticamente de tal manera que el contenido no se derrame; el diseño del recipiente debe de permitir que una etiqueta quede aun en condiciones de refrigeración o de congelación.

La recolección de muestra de orina es de varios tipos dependiendo el tipo de paciente:

-Primera micción de la mañana

-Una sola muestra aleatoria

-Muestra programada de corto plazo

-Muestra programada de largo plazo (12 o 24hrs.)

-Muestra por sonda

-Muestra de 2 micciones (8 para azúcar y cetona)

-Muestra del chorro medio

El volumen de orina depende del número de análisis solicitados, sin embargo, debe procesarse un volumen constante, el volumen ideal es de 12-15ml para el análisis de rutina. El tratamiento se da en base a los resultados obtenidos en caso que se requiera.

MATERIALES:

*  Muestra de orina analizar

*Tira reactiva                              

     

*Tubos de ensayo                  

*Centrifuga                             

*Microscopio

*Portaobjetos

*Cubreobjetos                                                   

      

DESARROLLO:

EXAMEN  MACROSCOPICO

Primeramente en este examen macroscópico se observó:

El aspecto:               transparente

La densidad:             1.010 –1.030

 El volumen:              800—250 ml

El color:                     amarillo ámbar

El olor:                       amoniacal (normal)

EXAMEN QUÍMICO

En este examen químico se utilizó la tira reactiva de orina, que es un instrumento de diagnóstico básico, que tiene por finalidad detectar, durante un examen rutinario de orina, algunos de los cambios patológicos que pueden aparecer en la orina de un paciente.

Pero antes se vacía un poco de la muestra de orina en un tubo de ensayo, se etiqueta el tubo, puede ser  con el nombre del paciente y evitar confusiones con otras muestras; para después colocar la tira reactiva dentro, luego se saca y se espera por un minuto para poder leerla.

Las reacciones en las tiras reactivas que se detectaron son:                                   

Densidad                                   1.020

pH                                         6

Leucocitos                             Negativo

Nitrito                                    Negativo 

Proteína                                Negativo                

Glucosa                                  Normal

Cuerpos cetonicos                  Negativo   

Urobilinògeno                          Negativo

Bilirrubina                                Negativo

Sangre                                       Negativo

Hemoglobina                             Negativo

  

EXAMEN MICROSCOPICO

Para este tipo de examen, el tubo de ensayo con la muestra se debe de centrifugar a 1500 RPM durante 5 minutos, ya después de esto se debe decantar, luego colocar una gota  del sedimento en un porta objetos y sobre este colocar  un cubre objetos.

Mediante el examen al microscopio se comprueba la presencia de células epiteliales renales y de elementos de la sangre que, presentes por lo común en pequeño número, pueden aumentar en caso de enfermedad, etcétera.

El número y tipo de células o material que se encuentra en la muestra de orina puede brindar información detallada sobre la salud del paciente y establecer diagnósticos específicos.

                                                                         

      Primeramente centrifugamos nuestra muestra de orina.       

        

Ya que centrifugamos nuestra muestra de orina, la decantamos  cerca de una fuente de agua.

Posteriormente pondremos una gota del sedimento en un portaobjetos para observar al microscopio a 10x y 40x.

10x._ Observé bacilos y cocos  dispersos en la muestra de orina.

40x._ La patología más frecuente  asociada a leucocitaria, es la infección urinaria.

Esta vez  se observó  u observaron leucocitos, lo cual indica que hay algún  infección urinaria, como se dijo anteriormente. 

CONCLUSIONES

El  EGO  no es más que una serie  de exámenes efectuados sobre la orina, donde podemos identificar el color, aspecto, densidad, pH, leucocitos, nitritos, entre muchos otros tipos de sustancias, por así llamarlos.

Además de que con este tipo de exámenes podemos determinar si el paciente tiene tal vez alguna infección o alguna enfermedad al respecto en el sistema urinario.

Todo esto lleva un procedimiento el cual debe efectuarse con cuidado, sobre todo con limpieza y responsabilidad.

BIBLIOGRAFIA

*http://www.cpnlac.org/memoriasacademicasinteramericano2009/files/El%20examen%20gen                       eral%20de%20orina.pdf

  *http://es.scribd.com/doc/8551012/Examen-General-de-Orina-Parte-III-Examen-Fisico

*http://es.wikipedia.org/wiki/An%C3%A1lisis_de_orina

*http://www.slideshare.net/AGDIEL/examen-general-de-orina